試驗(yàn)設(shè)計(jì) 500只AA肉雞隨機(jī)分為5組，分別為對照組、抗生素組（基礎(chǔ)飼糧+500mg/kg土霉素鈣）、L-XOS組（基礎(chǔ)飼糧+150mg/kg XOS）、M-XOS組（基礎(chǔ)飼糧+300mg/kg XOS）、H-XOS組（基礎(chǔ)飼糧+450mg/kg XOS）。每組5個重復(fù)，每個重復(fù)20只雞，試驗(yàn)肉雞營養(yǎng)需要參考NRC(1994)和前期研究結(jié)果進(jìn)行設(shè)計(jì)，基礎(chǔ)日糧配方設(shè)計(jì)見表1。  預(yù)試期7d，正式試驗(yàn)期42d，試驗(yàn)雞自由采食和飲水。按照常規(guī)免疫程序進(jìn)行免疫。飼養(yǎng)期為42d，記錄采食量、體重等數(shù)據(jù)。第42天，從每個重復(fù)中選取1只接近平均體重的雞進(jìn)行屠宰，每個處理組屠宰5只，屠宰前禁食12h，翅下靜脈采血4mL，經(jīng)離心機(jī)離心分離血清，-80℃冷凍保存。測量并記錄肉雞十二指腸、空腸、回腸的重量、長度和腸道pH，取2cm左右十二指腸、空腸、回腸固定在4%多聚甲醛用于H.E.染色，取部分回腸進(jìn)行RT-qPCR試驗(yàn)檢測腸道屏障相關(guān)基因mRNA的表達(dá)。 XOS對生長性能的影響見表2。與對照組相比，抗生素組、M-XOS組42d體重顯著增加（P<0.05），22~42d、1~42d增重顯著增加（P<0.05），22~42d、1~42d料重比顯著降低（P<0.05）；與L-XOS、H-XOS組相比，抗生素組的22~42d、1~42d增重顯著升高（P<0.05），22~42d、1~42d料重比顯著降低（P<0.05）；與L-XOS、H-XOS組相比，M-XOS組22~42d增重顯著升高（P<0.05），21~42d料重比顯著降低（P<0.05）。 生長性能是肉雞實(shí)際生產(chǎn)中常見的量化指標(biāo)，是評定飼料添加劑效果的重要指標(biāo)。本研究中抗生素組、M-XOS組42d肉雞體重、22~42d、1~42d增重顯著升高，21~42d、1~42d料重比顯著降低；表明XOS對肉雞的生長性能確實(shí)起到一定的改善效果。同時，與L-XOS、H-XOS組相比，M-XOS組22-42d增重顯著升高，22~42d料重比顯著降低，暗示當(dāng)XOS添加劑量過高時反而起到相反的效果。  XOS對肉雞免疫指標(biāo)的影響見表3。與對照組相比，抗生素組與M-XOS組顯著提高了肉雞血清的IgA、IgG水平（P<0.05），顯著降低了IL-1β、TNF-α的水平（P<0.05），提高了肉雞血清IgM的水平，但是差異不顯著（P>0.05）；與對照組相比，H-XOS組顯著提高了肉雞血清IgG水平（P<0.05），L-XOS、H-XOS組顯著降低了IL-1β、TNF-α的水平（P<0.05）；與L-XOS、H-XOS組相比，M-XOS組、抗生素組顯著降低了IL-1β、TNF-α的水平（P<0.05）。 血清生化指標(biāo)是重要的健康指標(biāo)。血清免疫球蛋白是具有已知抗體活性的動物來源的蛋白質(zhì)，通常存在于血液和組織液中，由免疫系統(tǒng)細(xì)胞合成以對抗外來物質(zhì)/抗原。家禽中主要的免疫球蛋白是IgA、IgG和IgM，血清中這3種免疫球蛋白的含量可以代表雞血清免疫球蛋白的總體水平。本研究結(jié)果顯示，抗生素與M-XOS顯著提高了肉雞的IgA、IgG水平，提高了IgM的水平，但是差異不顯著，進(jìn)一步證實(shí)了XOS確實(shí)可能提高肉雞的生產(chǎn)性能。且與L-XOS、H-XOS組相比，M-XOS組IL-1β、TNF-α的水平顯著降低，暗示高劑量的XOS反而沒有中劑量XOS的效果好。  XOS對腸道長度和重量的影響見表4。抗生素組與XOS組對肉雞十二指腸、空腸以及回腸的長度和重量均沒有顯著影響（P<0.05），M-XOS組和抗生素組可以使十二指腸的長度和重量有上升的趨勢，但是差異不顯著（P>0.05）。  XOS對腸道pH的影響見表5?？股亟M與XOS組對肉雞十二指腸、空腸的pH均沒有顯著影響，但是M-XOS組和抗生素組顯著降低了回腸的pH值（P<0.05）；與H-XOS組相比，M-XOS組顯著降低了回腸的pH（P<0.05）。  XOS對十二指腸、空腸、回腸絨毛長度、隱窩深度以及腸壁厚度的影響見表6。與對照組、L-XOS組相比，M-XOS組和抗生素組顯著升高了回腸的絨毛長度和隱窩深度（P<0.05）；但對十二指腸、空腸的絨毛長度和隱窩深度以及十二指腸、空腸、回腸的腸壁厚度沒有顯著影響（P＞0.05）。 腸道是動物消化吸收的主要場所，腸道的發(fā)育情況對動物健康和生長情況非常重要。腸道pH值被認(rèn)為是影響腸道消化吸收能力的關(guān)鍵，研究認(rèn)為酸性環(huán)境能夠促進(jìn)機(jī)體對日糧中營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，同時也有益于一些有益菌的生長，抑制一些有害菌的繁殖。腸道絨毛長度以及隱窩深度對于維持腸道屏障的完整性至關(guān)重要，腸道絨毛結(jié)構(gòu)的發(fā)育對于提高機(jī)體的營養(yǎng)吸收能力起積極影響。本研究結(jié)果顯示，抗生素與XOS對肉雞十二指腸、空腸的pH均沒有顯著影響，但是與對照組相比，M-XOS組和抗生素組顯著降低了回腸的pH以及回腸的絨毛長度和隱窩深度，暗示XOS可能對肉雞的消化吸收能力起到一定的改善效果，且XOS主要在消化道下段起作用。  XOS對腸道緊密連接蛋白表達(dá)的影響見圖1。與對照組相比，抗生素組顯著升高了Occludin、Claudin-1和ZO-1mRNA的表達(dá)水平（P<0.05）；M-XOS組顯著升高了Claudin-1和ZO-1 mRNA的表達(dá)水平（P<0.05），M-XOS組使Occludin mRNA的表達(dá)水平有上升的趨勢，但是差異不顯著（P>0.05），L-XOS、H-XOS組較對照組Claudin-1表達(dá)水平顯著上調(diào)（P>0.05），而抗生素組與L-XOS、H-XOS組相比，Occludin、Claudin-1mRNA表達(dá)水平顯著上升（P>0.05），而M-XOS組與L-XOS、H-XOS組相比，Claudin-1mRNA表達(dá)水平顯著升高（P>0.05）。 腸上皮的主要功能是形成屏障以防止腔內(nèi)抗原或病原體進(jìn)入黏膜并與免疫系統(tǒng)接觸，從而實(shí)現(xiàn)腸內(nèi)穩(wěn)態(tài)。當(dāng)腸道屏障被破壞時，會引發(fā)一系列的疾病，因此，腸道屏障完整性對于機(jī)體健康來說至關(guān)重要。物理屏障是有害物質(zhì)進(jìn)入腸黏膜的第一道屏障，它是由一層柱狀上皮細(xì)胞和細(xì)胞間緊密連接蛋白(TJ)組成的完整的上皮結(jié)構(gòu)，它在腸道屏障中有重要的位置。Claudins是TJ的結(jié)構(gòu)骨架，Occludin是第一個被發(fā)現(xiàn)的組成TJ的最主要成員，而ZO-1是支撐TJ結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)，可以影響腸道結(jié)構(gòu)的通透性。當(dāng)TJ被破壞時，腸道的通透性增加，抗原可通過腸道屏障，危及腸道健康。ZO-1、Claudins和Occludin的表達(dá)水平通常被用來評估腸通透性和腸道完整性好壞的重要依據(jù)。 本研究中，抗生素組顯著升高了Occludin、Claudin-1和ZO-1mRNA表達(dá)水平，M-XOS組顯著升高了Claudin-1和Mucin-2mRNA表達(dá)水平，M-XOS組使Occludin mRNA表達(dá)水平有上升的趨勢，但是差異不顯著，提示XOS確實(shí)可能對腸道屏障產(chǎn)生積極影響。  添加XOS可以顯著升高42日齡肉雞體重、22~42d、1~42d增重，顯著降低22~42d、1~42d料重比，提高肉雞的生長性能。添加XOS可以顯著提高IgA、IgG水平，顯著降低IL-1β、TNF-α的水平，增強(qiáng)肉雞的免疫功能。添加XOS可以增加回腸的重量、Claudin-1和Mucin-2 mRNA表達(dá)水平以及回腸的絨毛長度和隱窩深度，顯著降低回腸的pH值，從而改善腸道健康。在本試驗(yàn)條件下，XOS在肉雞飼糧中適宜的添加劑量為300 mg/kg，且XOS和抗生素對肉雞的影響效果比較接近，具有替抗的潛質(zhì)。 參考資料： |
