試驗(yàn)設(shè)計(jì) 菌株 長雙歧桿菌（Bifidobacterium longum 1.2186）、青春雙歧桿菌（Bifidobacterium adolescentis 1.2190）、嬰 兒 雙 歧 桿 菌 （ Bifidobacterium infantis 1.1853）、植 物 乳 桿 菌 （ Lactobacillus plantarum 1.557）均購自中國普通微生物菌種保藏管理中心；鼠李糖乳桿菌（Lactobacillus rhamnosus 6133）購自中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心。 菌株的活化培養(yǎng) 取48 h乳桿菌及雙歧桿菌培養(yǎng)物，按5%的比例分別轉(zhuǎn)接至新鮮的MＲS和BS液體培養(yǎng)基中，37℃厭氧培養(yǎng)24 h，取出于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/span> 低聚木糖對(duì)乳桿菌生長的影響 在MＲS培養(yǎng)基中分別加入0、0.2%、0.5%、1%低聚木糖，分為四組，其中不加低聚木糖的作為對(duì)照組，每組做三個(gè)重復(fù)，分裝于100 mL 輸液瓶中，121℃滅菌30 min，分別加入已培養(yǎng)好的2種乳桿菌菌液2 mL，37℃厭氧培養(yǎng)24 h后取出，測活菌數(shù)（平板計(jì)數(shù)法）。 低聚木糖對(duì)雙歧桿菌生長的影響 在BS培養(yǎng)基中分別加入0、0.2%、0.5%、1%低聚木糖，分為四組，其中不加低聚木糖的作為對(duì)照組，每組做三個(gè)重復(fù)，分裝于100 mL 輸液瓶中，121℃滅菌30 min，分別加入已培養(yǎng)好的3種雙歧桿菌菌液2 mL，37℃厭氧培養(yǎng)24 h后取出，測活菌數(shù)（平板計(jì)數(shù)法）。 低聚木糖對(duì)人體腸道菌群的影響 采用GAM培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基（未加葡萄糖），對(duì)照組1加1%葡萄糖，對(duì)照組2不加葡萄糖，試驗(yàn)組加0.5%低聚木糖。每組設(shè)3個(gè)平行樣，每個(gè)樣裝250 mL，共計(jì)分裝9個(gè)100 mL輸液瓶。加塞并插上針頭，然后115℃滅菌20 min，滅菌后拔出針頭。取新鮮糞便10 g加入100 mL稀釋液中充分混合，分別取上清液1 mL加入9個(gè)樣品中培養(yǎng)，37℃ 發(fā)酵。檢測發(fā)酵0、6、12、24 h發(fā)酵液中雙歧桿菌、乳酸桿菌、腸桿菌、腸球菌的數(shù)量（平板計(jì)數(shù)法）及發(fā)酵液的pH值。 試驗(yàn)結(jié)果 （1）低聚木糖對(duì)乳桿菌生長的影響 由表1可知，低聚木糖在不同濃度下，對(duì)2株乳桿菌生長的增殖促進(jìn)作用有所不同，對(duì)鼠李糖乳桿菌的增殖促進(jìn)作用明顯優(yōu)于植物乳桿菌；并且對(duì)鼠李糖乳桿菌的增殖作用在 1%和2%的濃度下與對(duì)照組差異顯著（P＜0.05），對(duì)植物乳桿菌的增殖作用只1%的濃度下差異顯著（P＜0.05）。  （2）低聚木糖對(duì)雙歧桿菌生長的影響 由表2可知，不同添加量的低聚木糖對(duì)3種雙歧桿菌生長的促進(jìn)作用有所不同，對(duì)長雙歧桿菌和青春雙歧桿菌的促進(jìn)作用在1%的濃度下與對(duì)照組差異顯著（P＜0.05），0.5%和2%的低聚木糖對(duì)其生長無明顯影響；而對(duì)嬰兒雙歧桿菌的促進(jìn)效果皆不明顯。  （3）低聚木糖對(duì)人體腸道菌群的影響 由表3可知，對(duì)大腸桿菌來說，隨著發(fā)酵時(shí)間的延長，對(duì)照組與試驗(yàn)組都是先升高后降低；在發(fā)酵12 h時(shí)，試驗(yàn)組明顯低于對(duì)照組1和對(duì)照組2，且差異極顯著（P＜0.01），對(duì)照組1與對(duì)照組2差異不顯著（P＞0.05）；發(fā)酵24 h時(shí)，試驗(yàn)組明顯低于對(duì)照組1和對(duì)照組2，且差異極顯著（P＜0. 01），對(duì)照組1低于對(duì)照組2，差異顯著（P＜0.05）。 由表3可知，對(duì)腸球菌來說，隨著發(fā)酵時(shí)間的延長，試驗(yàn)組與對(duì)照組皆呈升高的趨勢(shì)；在發(fā)酵6 h和12 h時(shí)，對(duì)照組2低于對(duì)照組1和試驗(yàn)組，且差異顯著（P＜0.05）；在發(fā)酵24 h時(shí)，試驗(yàn)組與對(duì)照組1、對(duì)照組2都達(dá)到了同一個(gè)數(shù)量級(jí)（108 ）上，且差異不顯著（P＞0. 05）。 由表3可知，對(duì)乳桿菌來說，隨著發(fā)酵時(shí)間的延長，試驗(yàn)組與對(duì)照組皆呈上升趨勢(shì)，在0 h 時(shí)，三組皆未檢測到乳桿菌；在6 h時(shí)，對(duì)照組1與試驗(yàn)組的乳桿菌數(shù)達(dá)到101-102，而對(duì)照組2未檢測到乳桿菌，并且試驗(yàn)組的乳桿菌數(shù)明顯高于對(duì)照組1和對(duì)照組2，與對(duì)照組1差異顯著（P＜0.05），與對(duì)照組2差異極顯著（P＜0.01），對(duì)照組1與對(duì)照組2差異極顯著（P＜0. 01）；在12 h時(shí)，試驗(yàn)組的活菌數(shù)皆高于對(duì)照組1和對(duì)照組2，但與對(duì)照組1差異不顯著（P＞0.05），與對(duì)照組2差異極顯著（P＜0.01），且對(duì)照組1與對(duì)照組2差異也極顯著（P＜0.01）；在24 h 時(shí)，試驗(yàn)組與對(duì)照組1、對(duì)照組2差異均極顯著（P＜0.01），對(duì)照組1與對(duì)照組2差異不顯著（P＞0.05）。 由表3可知，對(duì)雙歧桿菌來說，隨著發(fā)酵時(shí)間的延長，試驗(yàn)組與對(duì)照組皆呈上升趨勢(shì)，在0 h時(shí)，試驗(yàn)組與對(duì)照組1、對(duì)照組2差異不顯著（P＞0.05），在6 h時(shí)，試驗(yàn)組皆高于對(duì)照組，且差異極顯著（P＜0.01），但在12 h、24 h，3組之間差異均不顯著（P＞0.05）。對(duì) pH值來說：接種腸道菌群后發(fā)酵液的初始pH值均較高，隨著發(fā)酵時(shí)間的延長，發(fā)酵液的 pH值均呈下降趨勢(shì)。0-12 h，pH降低較快，至發(fā)酵后期pH值變化較平緩。葡萄糖培養(yǎng)基的pH值下降速度最快，最低降至4. 24，其次為低聚木糖組為4.62，不加糖的對(duì)照組為 5. 08，培養(yǎng)基pH值的降低是因?yàn)榧?xì)菌代謝多糖產(chǎn)生乳酸和短鏈脂肪酸所致。
試驗(yàn)結(jié)論 1%的低聚木糖對(duì)植物乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、長雙歧桿菌和青春雙歧桿菌有明顯的增殖作用；此外，低聚木糖能促進(jìn)人體腸道中乳桿菌和雙歧桿菌的增殖，抑制大腸桿菌的生長，且對(duì)腸球菌無明顯的增殖效果，表明低聚木糖對(duì)腸道菌群有較好的調(diào)節(jié)效果。 參考資料： 徐海燕,辛國芹,曹銀生,武香玉,汪孟娟,谷巍.低聚木糖對(duì)益生菌及人腸道菌群的影響[J].藥學(xué)研究, 2013, 32(09)：500-503. |
